Bruton's tyrosine kinase（簡稱BTK），是一種BTK基因編碼的酪氨酸激酶。BTK包含5個不同的蛋白質(zhì)相互作用域，包括氨基末端pleckstrin同源（PH）結(jié)構(gòu)域、富含脯氨酸的TEC同源（TH）結(jié)構(gòu)域、SRC同源（SH）結(jié)構(gòu)域SH2和SH3，以及具有激酶活性的結(jié)構(gòu)域。
 

Fig 1. BTK的結(jié)構(gòu)域


信號通路
 

BTK在B細(xì)胞發(fā)育中起著至關(guān)重要的作用，因?yàn)樗菑拿庖咔虻鞍字劓湷晒χ嘏藕笮纬傻那癇細(xì)胞受體傳遞信號所必需的，它還通過高親和力IgE受體在肥大細(xì)胞活化中起作用。BCR激活觸發(fā)信號小體的形成，其中包括蛋白酪氨酸激酶LYN、SYK和BTK，以及磷脂酶Cγ2和磷酸肌醇3-激酶。在信號小體內(nèi)，BTK被LYN和SYK磷酸化。SYK和BTK隨后磷酸化磷脂酶Cγ2，導(dǎo)致鈣動員，激活ERK、AKT和核因子-κB，隨后導(dǎo)致細(xì)胞存活、細(xì)胞增殖、分化和抗體產(chǎn)生。

Fig 2. BTK涉及的信號通路


BTK的抑制劑
 

BTK在許多B細(xì)胞白血病和淋巴瘤中表達(dá)，早在1999年，第一個合理設(shè)計(jì)的BTK的小分子抑制劑（LFM-A13）在體外被證明具有抗白血病活性，隨后更多的具有選擇性的BTK抑制劑，包括不可逆抑制劑依魯替尼（也稱為 PCI-32765）陸續(xù)被開發(fā)出來。依魯替尼用于證明BTK參與致癌BCR信號傳導(dǎo)，該信號傳導(dǎo)控制彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤 (ABC-DLBCL)的人類活化B細(xì)胞樣亞型的存活。依魯替尼單藥治療在II期試驗(yàn)中顯示出對慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL) 和套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)患者的令人鼓舞的臨床活性。因此，依魯替尼獲得突破性認(rèn)定，并于2013年被美國食品和藥物管理局 (FDA) 批準(zhǔn)用于治療復(fù)發(fā)性 MCL。
 

Fig 3. 常見靶向B細(xì)胞腫瘤的BTK小分子抑制劑
 

依魯替尼是一種口服抑制劑，可與BTK的半胱氨酸481共價(jià)結(jié)合，在臨床上發(fā)現(xiàn)依魯替尼治療后進(jìn)展的CLL患者中出現(xiàn)BTK C481S的突變，破壞了依魯替尼和BTK的共價(jià)結(jié)合，降低了對BTK酶活的抑制，因此第二代非共價(jià)的BTK抑制劑，不需要與C481結(jié)合，同時(shí)最近很火的針對BTK的抑制劑，當(dāng)屬于BTK-PROTAC了。

Fig 4. 常見靶向BTK的PROTAC的分子


BTK C481S的診斷
 

BTK C481S的檢測，直接影響依魯替尼的治療方案，因此在臨床上不管是什么方法，都是需要對這個位點(diǎn)做檢測的。

標(biāo)準(zhǔn)品
 

科佰生物作為一家專業(yè)提供分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品的公司，提供針對BTK C481S多種形式的產(chǎn)品（gDNA、ctDNA、FFPE等等），涉及多種技術(shù)平臺，對整個流程做質(zhì)控管理，也適合LDT和IVD的開發(fā)驗(yàn)證。

表1. BTK C481S的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)品


 部分?jǐn)?shù)據(jù)展示 




Fig 5. Sanger sequencing of BTK C481S for DNA


藥物靶點(diǎn)模型

 

針對BTK C481S的藥靶模型，在cell-based assay層面，我們構(gòu)建了基于BTK C481S驅(qū)動的baf3的模型，可以用于篩選針對C481S耐藥的小分子、大分子；同時(shí)也構(gòu)建了過表達(dá)BTK的穩(wěn)定細(xì)胞株，可以用于PROTAC技術(shù)。

表2. Cell-based assay of BTK include anti-proliferation and PROTAC

 部分?jǐn)?shù)據(jù)展示 

Fig 6. Sanger sequencing of BTK C481S for RNA