原代細(xì)胞

　　用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

　　細(xì)胞系

　　原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

　　也有認(rèn)為細(xì)胞系（cell line）指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系（Finite Cell Line）、無(wú)限細(xì)胞系（Infinite Cell Line），因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株（Cell Strain）。

　　細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

　　動(dòng)物細(xì)胞是生產(chǎn)治療性重組蛋白的強(qiáng)有力工具。為與小分子藥物區(qū)別開(kāi)來(lái)，治療性蛋白、疫苗以及細(xì)胞治療產(chǎn)品統(tǒng)稱為生物制品。宿主細(xì)胞的選擇和改造對(duì)于提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。因此必須對(duì)細(xì)胞進(jìn)行篩選，選出具有高表達(dá)量和良好生長(zhǎng)特性的細(xì)胞。在此我們主要討論適用于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白的細(xì)胞株的篩選。

　　工業(yè)上重組蛋白的制備主要有兩種方式：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染經(jīng)常用于制備少量蛋白（多達(dá)克級(jí)）用于藥物開(kāi)發(fā)早期的蛋白活性或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染并不產(chǎn)生克隆細(xì)胞株，它只是暫時(shí)將編碼外源蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)入已有的細(xì)胞株里面（比如HEK293或COS細(xì)胞）。隨著細(xì)胞的分裂外源基因不斷丟失，蛋白產(chǎn)量較低，一般在1-100mg/L。近年來(lái)有報(bào)道稱HEK293細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)量可達(dá)1g/L。

　　與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞株是為工業(yè)化生產(chǎn)治療性蛋白而構(gòu)建的。穩(wěn)定細(xì)胞株需要具備在不同的時(shí)間，不同的場(chǎng)地以及不同的批次間生產(chǎn)相同質(zhì)量產(chǎn)品的能力。在選定生產(chǎn)用細(xì)胞株之后，需要建立主細(xì)胞庫(kù)（mater cell bank）。從主細(xì)胞庫(kù)復(fù)蘇后，擴(kuò)增建立工作細(xì)胞庫(kù)（working cell bank），工作細(xì)胞庫(kù)用于生產(chǎn)。細(xì)胞庫(kù)通常保存在液氮中，需要維持整個(gè)產(chǎn)品的生命周期。在構(gòu)建生產(chǎn)用細(xì)胞株的過(guò)程中，宿主細(xì)胞和表達(dá)載體至關(guān)重要。

上一篇 : ATCC細(xì)胞的分類檢測(cè)是怎么完成的？    下一篇 :  ATCC細(xì)胞株購(gòu)買運(yùn)輸是關(guān)鍵

>> 返回首頁(yè)